Reprogramação Metabólica Restaura Capacidade de Produzir Insulina em Linfócitos B-1 de Camundongos C57BL/6

Resumo

Dentre as doenças crônicas não transmissíveis, a Diabetes mellitus está entre as principais causas de morte no mundo e segue, ainda, sem cura. As terapias celulares têm sido exploradas a fim de repor a função perdida de células β pancreáticas. Foi demonstrada a capacidade de produção de insulina por linfócitos B- 1 e estudos preliminares sugerem que existe uma possibilidade de restaurar essa característica em linfócitos B-1 comprometidos funcionalmente por reprogramação metabólica (RM). O presente estudo objetivou investigar a influência da RM na produção de insulina por linfócitos B-1 provenientes de camundongos suscetíveis ao desenvolvimento de diabetes por estreptozotocina. Deste modo, células peritoneais aderentes de camundongos C57BL/6 foram submetidas ao protocolo de RM para a produção de insulina, que consiste no cultivo das células em meio suplementado com Crotoxina, altas concentrações de glicose e Nicotinamida. Após a aplicação do protocolo, os linfócitos B-1 foram avaliados quanto ao metabolismo de glicose, pela captação de glicose e expressão de genes relacionados ao transporte e lise desse carboidrato e quanto à produção de insulina pela expressão gênica dos genes de insulina ou associados à sua produção e, ainda, foi verificada a presença de grânulos de insulina no citoplasma das células após a reprogramação celular. As células B-1 submetidas ao protocolo de RM demonstraram aumento da viabilidade celular e diminuição na expressão de 2-NBDG, ou seja, menor captação de glicose por essas células. Corroborando esse resultado, a expressão dos genes da enzima hexoquinase HK1, HK2 e do transportador de glicose Glut1 também estava diminuída comparado às células controle, que não receberam os estímulos de RM. A expressão dos genes de fosfofrutoquinase Pfkl e Pfkm não revelou diferenças e a expressão gênica de Cpt1b estava diminuída após a RM, sugerindo que a via lipolítica também não foi ativada. A avaliação epigenética demonstrou uma tendência à hipermetilação específica do gene Hk1a em linfócitos B-1 RM, comparados ao controle. Já os genes de insulina, Ins1 e Ins2 demonstraram expressão gênica relativa aumentada em linfócitos B-1 após o protocolo de RM. Também, a expressão gênica relativa de Neurod1, que codifica o fator de transcrição associado à expressão dos genes de insulina, também estava aumentada. A presença de grânulos de insulina no citoplasma das células, dada pela imunofluorescência, confirma esses dados. Em conjunto, esses resultados demonstram a eficiência da RM em restaurar e/ou otimizar a produção de insulina por linfócitos B-1, provavelmente de maneira independente da via glicolítica clássica, reforçando a viabilidade do estabelecimento de uma terapia celular a partir dessas células para o controle glicêmico de pacientes diabéticos e a necessidade de aprofundar as investigações sobre o papel dos linfócitos B-1 na manutenção e/ou promoção da normoglicemia.