Modelo in vitro para o estudo da resposta de macrófagos desafiados com Malassezia furfur ou Malassezia pachydermatis

Resumo

As leveduras lipofílicas, Malassezia pahydermatis e Malassezia furfur, fazem parte do microbioma cutâneo, vivendo em uma relação comensal com os hospedeiros; mas, diante de fatores predisponentes podem assumir comportamento patogênico e causar graves infecções invasivas no homem, especialmente em neonatos prematuros submetidos à administração de nutrição parenteral suplementada com lipídios. Nas infecções, em particular naquelas invasivas, pouco se sabe a respeito da resposta imunológica inata ou adaptativa desencadeada pelas espécies de Malassezia. Sendo a fagocitose um importante mecanismo da resposta imune foi objetivo deste trabalho padronizar modelo de fagocitose in vitro por macrófagos da linhagem RAW 264.7 desafiados por M. furfur e M. pachydermatis, comparando-se o comportamento das duas espécies e avaliando-se a produção de óxido nítrico e citocinas durante o processo de fagocitose. Macrófagos murinos da linhagem RAW 264.7 foram desafiados com cepas de M. furfur CBS-1878 e M. pachydermatis CBS-1696, nas razões de 5:1 e 2:1 (razão leveduras:macrófagos) em intervalos de leitura de 6h, 24h e 48h após os desafios, determinando-se os índices fagocíticos. Realizou-se nos mesmos intervalos de tempo, a dosagem de óxido nítrico por método colorimétrico e de citocinas pró- e anti-inflamatórias (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IFN-γ e TNF-α) por citometria de fluxo. Os resultados mostraram maior índice fagocítico na razão de 5:1, tanto para M. pachydermatis quanto para M. furfur, no intervalo de 24 h. Foram observadas diferenças entre as espécies, verificando-se índices fagocíticos superiores quando os macrófagos foram desafiados com M. pachydermatis. Nas leituras de fagocitose às 48h, houve evasão das leveduras, detectando-se grande proliferação dos micro-organismos e morte de macrófagos, particularmente ante M. pachydermatis. Houve grandes variações na produção de óxido nítrico pelos macrófagos, nos diferentes intervalos de tempo, ante as duas espécies e dentre as citocinas pesquisadas nos sobrenadantes das culturas de macrófagos infectados com M. pachydermatis e M. furfur, apenas foram detectadas TNF-α e IL-4, em que macrófagos infectados com M. furfur determinaram maior produção da citocina pró-inflamatória TNF-α e com M. pachydermatis, aumento da produção da citocina anti-inflamatória IL-4. A ocorrência de fagocitose de M. furfur e M. pachydermatis por macrófagos in vitro e a presença de citocinas pró- e anti-inflamatórias reforçam o caráter dinâmico da relação destas leveduras com o hospedeiro.