Modelo experimental de pneumonia intersticial induzida por Encephalitozoon cuniculi via intranasal e a resposta imune pulmonar associada

Resumo

Microsporídios são fungos intracelulares obrigatórios, oportunistas, que infectam muitos hospedeiros vertebrados e invertebrados, causando infecções disseminadas ou localizadas. A transmissão orofecal predomina em vertebrados. Os esporos eliminados pelas fezes, urina ou secreções respiratórias contaminam a água e alimentos, sendo adquiridos frequentemente pela via digestiva, embora ocorram infecções experimentais pelas vias hematógena, intraperitoneal e orofaríngea. A pneumonia causada por Encephalitozoon cuniculi tem sido associada à disseminação hematógena embora a transmissão aerógena seja considerada, ela não foi experimentalmente demonstrada. O presente trabalho teve objetivo de avaliar a infecção por E. cuniculi pela via intranasal em camundongos imunocomprometidos ou não, assim como analisar o padrão de resposta imune pulmonar. Foram realizados 3 experimentos: no experimento A- camundongos C57BL/6 foram tratados ou não com ciclofosfamida (Cy) e inoculados com esporos de E. cuniculi pela via intranasal. Após 14 dias de infecção, foi realizada a coleta de sangue para análise das citocinas do plasma e do inflamassoma NRLP3 nos leucócitos, lavado broncoalveolar para análise citológica e a coleta dos pulmões para análise histopatológica, fenotipagem das células imunes por citometria e quantificação da carga fúngica. No experimento B, camundongos wild type, IL-17RA-/- e Rag-1-/- foram inoculados com esporos de E. cuniculi pela via intranasal. Após 14 dias de infecção, foi realizada a coleta de soro para análise das citocinas, coleta dos pulmões para análise histopatológica e fenotipagem das células imunes por citometria. No experimento C- culturas de células pulmonares da linhagem H292 foram desafiadas com diferentes concentrações de esporos de E. cuniculi por célula por período de 24 e 72 horas e todos os esporos produzidos foram contabilizados. A inoculação de esporos de E. cuniculi pela via intranasal promoveu pneumonia intersticial em todos os animais infectados. Os animais tratados com Cy e infectados tiveram quadro de pneumonia intersticial mais intenso com maior carga fúngica, menores percentuais de linfócitos T CD8+ e T CD4+ e aumento de citocinas pró-inflamatórias TNF-α e IL-2. Os animais IL-17RA-/- e Rag-1-/- infectados apresentaram pneumonia clínica e histológica mais exacerbada, menor percentual de linfócitos T CD8+ ou menor percentual de ativação funcional dos mesmos e associado ao baixo perfil de citocinas pró-inflamatórias. Houve redução de macrófagos alveolares M1 nos animais infectados, com exceção dos camundongos IL-17RA-/-. As células H292 permitiram a proliferação dos esporos de E. cuniculi. Portanto concluímos que a inoculação de esporos de E. cuniculi pela via intranasal determinou pneumonia intersticial. Os camundongos imunocomprometidos, em especial IL-17RA-/- e Rag-1-/-, tiveram pneumonia mais grave que os animais controles, sendo a menor resistência ao patógeno associada ao menor resposta de linfócitos T CD8.