Estudo da expressão e regulação por microRNAs da proteína Tnfaip2 nas células de adenocarcinoma mamário murino após interações com macrófagos

Resumo

Nanotubos de tunelamento (TNTs) são pontes citoplasmáticas que medeiam interações entre diferentes tipos celulares. No câncer, o aumento de TNTs está diretamente relacionado com a aquisição de maior potencial agressivo pelas células tumorais. Estudos recentes com macrófagos mostraram que a formação dos TNTs está associada de forma direta ao aumento da proteína Tnfaip2, entretanto nas células tumorais essa associação não foi investigada por completo. Assim, uma vez que macrófagos presentes no microambiente tumoral interagem direta ou indiretamente com células tumorais e participam ativamente de todas as etapas da tumorigênese, o intuito do presente estudo foi avaliar a expressão e regulação epigenética da proteína Tnfaip2 nas células de adenocarcinoma mamário antes e após interações com macrófagos. Para isto, células de adenocarcinoma mamário 4T1(células 4T1) cultivadas sozinhas ou, com macrófagos RAW 264.7 ou seu sobrenadante, mantidas por 12, 24 e 48 horas, foram submetidas a analises por microscopia de luz e citometria de fluxo para determinação do número de estruturas tipo TNTs e, quantificação da expressão da proteína Tnfaip2, respectivamente. Em paralelo, coculturas de macrófagos e células 4T1 após 48 h, foram submetidas à separação por cell sorter, para análises da expressão gênica do Tnfaip2 em ambas as células, por qPCR. Adicionalmente, foram realizadas análises da expressão de transcritos de sete microRNAs (miR-145, miR-184, miR-221, miR-3103, miR-3569, miR-5107 e miR-7066), envolvidos na regulação da expressão de Tnfaip2. Os dados aqui obtidos demonstraram aumento expressivo de projeções citoplasmáticas tipo TNTs nos cocultivos de células 4T1 com macrófagos, com reduzida expressão da proteína Tnfaip2 em células 4T1 após interações com macrófagos. Em contraste, análises de expressão gênica mostraram aumento dos transcritos de Tnfaip2 e dos microRNAs avaliados nas células 4T1 após interação com macrófagos. Em paralelo, análises de wound healing sugerem diminuição na capacidade migratória das células 4T1 também após contato com macrófagos. Em conjunto, os resultados aqui apresentados sugerem que interações físicas com macrófagos induzem menor potencial agressivo das células 4T1, mediado provavelmente pela expressão de microRNAs envolvidos na regulação pós-transcricional da proteína Tnfaip2, gene envolvido com progressão celular e metástases.