Avaliação e caracterização de vesículas extracelulares liberadas por células de adenocarcinoma mamário 4T1 após interação com macrófagos RAW 264.7

Resumo

O câncer define-se, em geral, como a proliferação anormal e descontrolada das células, por alterações no DNA que leva à formação de tumores. O câncer de mama é o tipo mais comum e o segundo mais letal na população feminina no mundo todo, devido principalmente à presença de metástases, que caracterizam o tipo mais agressivo da doença. Diversos estudos têm mostrado que interações entre células tumorais e macrófagos no microambiente tumoral são relevantes para aquisição de um fenótipo mais agressivo. Entretanto, até o momento, são inexistentes os trabalhos mostrando a produção de vesículas extracelulares (EVs) durante estas interações. Assim, o intuito do presente trabalho foi avaliar e caracterizar vesículas extracelulares produzidas por células de adenocarcinoma mamário 4T1 antes e após interação com macrófagos em modelo in vitro. Para isto, EVs produzidas por células 4T1 antes e após interação com macrófagos RAW 264.7 foram coletadas e submetidas, tanto a análises físico-químicas como biológicas, para sua caracterização e avaliação de seus efeitos sob macrófagos. Análises de microscopia eletrônica de varredura e quantificação proteica mostraram que células 4T1 após contato com macrófagos tem redução na produção de EVs e possuem menor capacidade de migração quando comparadas com células 4T1 que não entraram em contato com macrófagos. A caracterização das EVs por análises de rastreamento de nanopartículas (NTA) e por citometria de fluxo revelaram que as EVs produzidas são em maioria de tamanhos entre 100 a 200 nm com quantidades semelhantes de exossomos e microvesículas. Em relação ao efeito biológico, macrófagos tratados com EVs principalmente, aquelas produzidas por células 4T1 antes da interação com macrófagos apresentaram aumento tanto no índice fagocítico como na capacidade de eliminação do material fagocitado. Em conjunto, os resultados aqui apresentados sugerem que macrófagos modulam a produção de EVs nas células 4T1, estas EVs por sua vez, podem ser as responsáveis diretas pelo perfil mais agressivo das células 4T1. Portanto, a redução da produção de EVs por células 4T1, induzida pelo contato com macrófagos pode ser um mecanismos promissor para o controle de tumores altamente agressivos, como é o adenocarcinoma mamário.