Avaliação de coculturas de macrófagos e Leishmania (L.) amazonensis após o tratamento de preparações homeopáticas

Anexos

Informações

Título

Avaliação de coculturas de macrófagos e Leishmania (L.) amazonensis após o tratamento de preparações homeopáticas

Autor(es)

Fabiana Rodrigues de Santana

Orientador(es)

Leoni Villano Bonamin

Data de Defesa

21/10/2016

Resumo

A leishmaniose é uma das doenças negligenciadas e pode ocorrer na forma tegumentar ou visceral. Este projeto visa esclarecer os mecanismos deflagrados por medicamentos homeopáticos em cocultura de macrófagos e Leishmania (L.) amazonensis in vitro. Os tratamentos foram realizados com Antimonium crudum (AC) nas potências 30 cH e 200 cH em 2, 24, 48, 72, 96 e 120 horas de incubação. A metodologia utilizada para avaliar a interação macrófago, leishmânia e medicamentos homeopáticos foi: área celular e fagocitose por meio da coloração por Giemsa, ensaio de liberação de peróxido de hidrogênio e óxido nítrico, ensaio imune-enzimático pelo método MAGPIX®, microscopia de fluorescência, microscopia eletrônica de varredura e imunocitoquímica. Os resultados mostraram diminuição da área de macrófagos tratados com AC 30 cH em 2h (p<0.05) e aumento após tratamento com AC 200 cH (p<0.05) em 48 horas, em conjunto com aumento da porcentagem de fagocitose (p<0.05). A produção de citocinas IL-6, IL-12p40, MIP-1β e IFN-γ foi reduzida nas células infectadas e tal redução foi potencializada após o tratamento com AC 30 cH (p<0.05) e 200 cH (p<0.05) no período de 48 horas. Na fase crônica, o VEGF apresentou grande aumento após tratamento com AC 200 cH (p<0.05) em 72 e 96 horas. A citocina RANTES apresentou diminuição nos grupos tratados com AC 200 cH (p<0.05) e AC 30 cH (p<0.05), nos períodos de 72 e 96 horas. Na microscopia de fluorescência, houve redução de vacúolos ácidos em macrófagos tratados com AC 30 cH após 2 horas de incubação, seguida de aumento no número de promastigotas livres no sobrenadante em 24 horas (p<0.05), indicando redução no ritmo de internalização dos parasitas. A microscopia eletrônica de varredura não mostrou diferença entre os grupos em relação à adesão parasita-macrófago. Na marcação para B7-2 (CD86), houve aumento de positividade nas células infectadas (controle) e no grupo tratado com AC 30 cH (p<0.05) em 72 horas, mas não nas células tratadas com AC 200 cH. Os resultados mostram os mecanismos modulatórios de macrófagos infectados e tratados com AC 30cH que poderiam justificar as mudanças observadas previamente na relação parasito-hospedeiro após o tratamento de camundongos com este medicamento. Também mostraram o efeito facilitador da polarização M1-M2 de macrófagos após o tratamento com AC 200 cH, cujo papel terapêutico poderia ser importante como modulador da fase crônica da infecção.

Resumo (EN)

Leishmaniasis is a neglected disease that can occur in cutaneous or visceral forms. This project aims to clarify the mechanisms of homeopathic treatment on the coculture of macrophages and Leishmania (L.) amazonensis in vitro. The treatments were conducted with Antimonium crudum (AC) 30 cH and 200cH and cells were evaluated at 2, 24, 48, 72, 96 and 120 hours after infection. The methodology used was cell area measurement and phagocytosis by Giemsa staining, hydrogen peroxide and nitric oxide release measurement, immunoenzymatic test by MAGPIX® method, fluorescence microscopy, scanning electron microscopy and immunocytochemistry. The results showed reduction of macrophages area treated with AC 30 cH (p <0.05) and increase following the treatment with AC 200 cH (p<0.05) within 48 hours, together with increase in the percentage of phagocytosis (p<0.05). The production of IL-6, IL-12p40, MIP-1β and IFN-γ in infected cells was reduced, being this effect potentiated after the treatment with AC 30 cH (p<0.05) and 200 cH (p<0.05), also within 48 hours. In the chronic phase, VEGF has greatly increased after treatment with AC 200 cH (p<0.05) at 72 and 96 hours. RANTES showed a decrease in AC 200 cH (p<0.05) and AC 30 cH (p<0.05) treated groups, after 72 and 96 hours. In fluorescence microscopy, there was a reduction of acids vacuoles in macrophages treated with AC 30 cH after 2 hours of incubation, followed by increase in the number of free promastigotes in the supernatant, at 24 hours (p<0.05), indicating reduction of the internalization rate of the parasites. The scanning electron microscopy showed no difference among groups with respect to parasite-macrophage adhesion. Immune-positivity for B7-2 (CD86) increased in infected cells (control) and in the group treated with AC 30 cH (p<0.05) at 72 hours, but not in cells treated with AC 200cH. The results showed the modulatory mechanisms of macrophages infected and treated with AC 30cH that could justify the changes previously observed in the host-parasite relationship after treatment of mice with this medicine. They also showed the facilitating effect of the M1-M2 polarization of macrophages after treatment with AC 200cH, which could be important as a modulator of the chronic phase of infection.

Tipo

Tese

Palavras-chave

Leishmaniose, Homeopatia, Antimonium crudum, Macrófagos

Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq

Biologia da diferenciação e transformação celulares: modulação por fatores endógenos e exógenos

Instituição

UNIP

Direito de Acesso

Acesso Aberto