Análise in vitro de macrófagos infectados por Encephalitozoon cuniculi após tratamento com altas diluições de Phosphorus

Anexos

Informações

Título

Análise in vitro de macrófagos infectados por Encephalitozoon cuniculi após tratamento com altas diluições de Phosphorus

Autor(es)

Mirian Yaeko Dias de Oliveira Nagai

Orientador(es)

Leoni Villano Bonamin

Data de Defesa

15/12/2017

Resumo

Encephalitozoon cuniculi é um fungo que age como um patógeno intracelular e infecta diferentes tipos celulares. Nos coelhos e animais imunossuprimidos de outras espécies, incluindo humanos, ele parasita tecidos nervosos e causa uma síndrome neurológica muito característica, sendo esta infecção uma preocupação zoonótica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade de macrófagos infectados com E. cuniculi após o tratamento com altas diluições de Phosphorus in vitro. Para isso, culturas de macrófagos RAW 264.7 e E. cuniculi expostas a diferentes diluições de Phosphorus foram analisadas de acordo com os seguintes parâmetros: fagocitose, atividade lisossomal, produção de citocinas/quimiocinas e análise ultraestrutural. A solução controle foi o veículo usado para produzir a matriz dos medicamentos testados (30% de álcool diluído 1:100 em água, sendo 0,06% a concentração final de álcool). As avaliações foram realizadas 01 e 24 horas pós-infecção. Fagocitose e atividade lisossomal foram avaliadas usando, respectivamente, os métodos de coloração calcofluor e laranja de acridina, seguida de análise automática de imagem (Ofline Metamorph®). A produção de citocinas foi avaliada usando o sistema MAGPIX-LUMINEX. Os experimentos foram realizados em triplicata. O próprio veículo pôde aumentar a produção de IL-6, TNF alfa e MCP1 (p<0,04), reduzindo o número de parasitas fagocitados (p<0,001). Um aumento transitório de RANTES foi visto após 1 hora do tratamento com Phosphorus 200cH, seguido do aumento da atividade lisossomal na primeira e 24 horas do tratamento (p<0,002). As características ultraestruturais dos parasitas internalizados após o tratamento com Phosphorus 200cH mostraram evidências de uma atividade mais intensa de digestão do parasita em relação a células tratadas apenas com o veículo. Os resultados mostram que o tratamento dos macrófagos infectados com Phosphorus 200cH causa mudanças significantes na sua atividade, sugerindo mais mecanismos para entender a melhora clínica de animais doentes, vista após o tratamento com este medicamento.

Resumo (EN)

Encephalitozoon cuniculi (E.cuniculi) is a fungus that acts as an intracellular pathogen and infects different cell types. In the rabbit and immunosuppressed animals from other species, including humans, it parasites neural tissues and cause a very characteristic neurological syndrome, being this infection a zoonotic concern. Herein, the aim was to evaluate the activity of macrophages infected with E. cuniculi after treatment with high dilutions of phosphorus in vitro. For this, co-cultures of macrophages RAW 264.7 and E. cuniculi exposed to different high dilutions of Phosphorus were analyzed according the following parameters: phagocytosis, lysosome activity, cytokines/chemokines production and ultrastructure analysis. The control solution was the vehicle used to produce the matrix of the tested medicines (30% alcohol diluted 1:100 in water, being 0.06% the final alcohol concentration). Evaluations were performed at 01 and 24 hours post-infection. Phagocytosis and the lysosome activity were evaluated using, respectively, calcofluor and acridine orange staining methods, followed by automatic image analysis (Ofline Metamorph®). The cytokine production was evaluated using the MAGPIX-LUMINEX system. The experiments were done in triplicate. The vehicle itself could increase IL6, TNF alpha and MCP1 production (p<0.04), reducing the number of phagocyted parasites (p<0.001). A transitory increase of RANTES was seen after 1 hour of treatment with Phosphorus 200cH, followed by increase of the lysosome activity in the first and 24 hours of treatment (p<0.002). The ultra-structural features of internalized parasites after Phosphorus 200cH treatment show evidences of more intense parasite digestion activity in relation to the cells treated with the vehicle only. The results show that the treatment of infected macrophages with Phosphorus 200cH causes significant changes in their activity, suggesting some mechanisms to understand the clinical improvement of sick animals, seen after the treatment with this medicine.

Tipo

Dissertação

Palavras-chave

Encephalitozoon cuniculi, Macrófagos, Phosphorus, Modelos In Vitro, Homeopatia

Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq

Toxicologia do sistema nervoso central

Instituição

UNIP

Direito de Acesso

Acesso Aberto