Efeito da Low-Level Laser Therapy na expressão gênica de TRPA1 e TRPM8 em ratos com hipersensibilidade dentinária

Resumo

O objetivo geral deste estudo foi analisar a expressão gênica de TRPA1 e TRPM8 em ratos com hipersensibilidade dentinária (HD), bem como o efeito do tratamento com Low-level laser therapy (LLLT) sobre a expressão desses genes. O estudo foi dividido em duas partes.
Parte 1: O objetivo desta etapa foi avaliar a relação entre a HD e a expressão de TRPA1 e TRPM8, em ratos, por meio de PCR real time. Foram utilizados 40 ratos, Wistar, machos, adultos (n total = 40), divididos aleatoriamente em dois grupos, que receberam os seguintes tratamentos por 30 dias: GC (água filtrada, n = 20) e GH (bebida ácida, ad libitum para indução de HD -n= 20). A superfície vestibular dos molares inferiores direitos foi periodicamente estimulada com água a 15 graus, por 5 segundos, nos dias 15, 22, 24, 26, 28 e 30 de tratamento. O grau de dor recebeu os escores de 0 a 3. Após a eutanásia, os elementos dentais do lado direito foram seccionados na altura da junção cemento esmalte e as coroas dentais foram armazenadas em solução estabilizadora de RNA (RNAlater) até o momento de sua manipulação, quando foi realizada a extração de RNA total e a síntese do cDNA. Os primers para GAPDH (gene de referência), TRPA1 e TRPM8 foram desenhados e a quantificação dos genes foi realizada por meio de RT-PCR. Para a confirmação da exposição tubular, as porções coronárias dos molares esquerdos dos dois grupos foram preparadas para análise em microscópio eletrônico de varredura. As análises estatísticas foram (p < 0,05): dor ao longo do tempo: teste de Friedman; escore de dor entre os grupos, dentro de cada tempo: teste de Mann-Whitney; comparação da expressão gênica em relação aos diferentes grupos: Teste de Mann-Whitney; relação entre os TRPs A1 e M8: correlação de Pearson; relação grau de dor e expressão gênica nos diferentes grupos: correlação de Spearman. Para a variável dor, os resultados demonstraram que houve um aumento significante no grau de dor para o GH enquanto que não houve diferença ao longo do tempo para o GC. As imagens em MEV apresentaram em GH, exposição de túbulos compatível com o grau de dor, enquanto GC apresentou camada de smear layer e túbulos obliterados. Para a variável TRP, verificou-se um aumento estatisticamente significante na expressão gênica de TRPA1 e TRPM8 em GH quando comparado com GC. A partir dos resultados, pôde-se concluir que a hipersensibilidade dentinária é capaz de alterar a expressão gênica desses receptores.
Parte 2: O objetivo desta etapa foi avaliar o efeito da fotobiomodulação nos genes TRPA1 e TRPM8 em ratos com HD, tratados com LLLT. Foram utilizados 38 ratos, Wistar, machos (n total = 38), divididos aleatoriamente em 4 grupos que receberam por 30 dias os seguintes tratamentos: GC - Grupo Controle (mandíbula direita, n = 19): água filtrada; GL - Grupo Laser (mandíbula esquerda, n = 19): água filtrada + LLLT; GH - Grupo Hipersensibilidade (mandíbula direita, n = 19): bebida ácida, ad libitum, para indução de HD; GHL - Grupo hipersensibilidade laser (mandíbula esquerda, n = 19): bebida ácida + LLLT. Os grupos GL e GHL receberam irradiação com Laser de ArGaAl (780-830nm - E = 0.5J; t = 7s; D = 18J/cm2; P = 70mW.), no molar inferior esquerdo, aos dias 24, 26 e 28 de tratamento. A superfície vestibular dos molares inferiores foi periodicamente estimulada com água a 15 graus, por 5 segundos, seguido de teste de dor, realizado nos dias 15, 22, 24, 26, 28 e 30. Nos dias em que houve LLLT (24, 26 e 28), foram realizados testes em baseline e imediato. Após a eutanásia, os elementos dentais foram armazenados em solução estabilizadora de RNA (RNAlater) até o momento de sua manipulação, quando foi realizada a extração de RNA total e a síntese do cDNA. Os primers para GAPDH, TRPA1 e TRPM8 foram desenhados e a quantificação dos genes foi realizada por meio de RT-PCR. Análises estatísticas (p < 0,05): grau de dor ao longo do tempo: teste de Friedman; comparação intragrupos, dentro de cada tempo e comparação dos lados (GL e GHL): Wilcoxon; comparação intergrupos: Mann-Whitney; comparação da expressão gênica em relação aos diferentes grupos (GC e GH): Mann-Whitney. Os animais com HD apresentaram escores elevados de dor em comparação aos grupos água. O lado irradiado (GHL) apresentou menores escores quando comparado ao lado não irradiado (GH) no imediato, tanto no 24º dia (p=0,014) quanto no 26º (p=0,002). A partir do 28º dia, o GHL apresentou menores valores de dor em ambos os tempos (baseline e imediato). Foram verificados maiores níveis na expressão de ambos os receptores nos grupos com HD (GH e GHL), independente da irradiação. Concluiu-se que o laser foi eficaz na redução da dor, mas não modulou a expressão gênica dos TRP’s A1 e M8, não sendo possível estabelecer uma correlação entre a diminuição da dor e a expressão dos TRPs.