Long-Term In Vitro Passaging Had a Negligible Effect on Extracellular Vesicles Released by Leishmania amazonensis and Induced Protective Immune Response in BALB/c Mice.

Resumo

Dependendo da espécie de Leishmania e da presença/ausência de fatores de virulência, as vesículas extracelulares (VEs) de Leishmania podem estimular as células imunes do hospedeiro de maneiras diferentes. Este trabalho teve como objetivo caracterizar e avaliar o papel protetor das VEs liberadas por promastigotas de Leishmania amazonensis sob diferentes condições de manutenção. Inicialmente, utilizando uma cepa controle, padronizamos 26°C como a melhor temperatura de liberação para obtenção de VEs com potencial papel protetor no modelo experimental de leishmaniose. Em seguida, promastigotas de longo prazo (LT-P) de L. amazonensis foram obtidas após cultivo in vitro prolongado (100 passagens in vitro ). Promastigotas de L. amazonensis derivadas in vivo (IVD-P) foram selecionadas após 3 infecções experimentais consecutivas em camundongos BALB/c. Essas cepas desenvolveram lesões de tamanho semelhante, com exceção da IVD-P, 8 semanas após a infecção. Nenhuma diferença na produção de VEs foi detectada entre as duas cepas. No entanto, a presença de LPG foi diferente entre as VEs LT-P e IVD-P. Grupos de camundongos imunizados com EVs emulsionadas em adjuvante e desafiados com parasitas IVD-P apresentaram redução no tamanho da lesão e na carga parasitária em comparação com os grupos não imunizados. O regime de imunização com duas doses demonstrou altos títulos de IFN- γ e IgG2a em camundongos desafiados com EVs IVD-P ou LT-P. IL-4 e IL-10 foram detectadas em camundongos imunizados, sugerindo um perfil misto Th1/Th2. As EVs liberadas por IVD-P ou LT-P induziram um efeito protetor parcial em um modelo de imunização. Assim, nossos resultados revelam um potencial papel protetor das EVs de L. amazonensis para a leishmaniose cutânea. Além disso, a manutenção a longo prazo em condições in vitro não pareceu afetar a liberação de EVs e suas propriedades imunizantes em camundongos.