Phenotypic Changes in Mammary Adenocarcinoma (4T1) cells In Vitro after Treatment with Carcinosinum
Título (EN)
Phenotypic Changes in Mammary Adenocarcinoma (4T1) cells In Vitro after Treatment with Carcinosinum
Autor(es)
Thais C Silva | William Alves dos Santos | Sandra AG Pinto | Paulo Ricardo Rocha | Elizabeth CP Hurtado | Leoni V Bonamin
Instituição
Universidade Paulista
Tipo
Artigo
Tipo de Mídia
ISSN
Resumo (EN)
The present study aimed to identify possible phenotypic changes in 4T1 (murine mammary adenocarcinoma) cells in vitro, including viability, HER-2 (human epidermal growth factor receptor-type 2) expression, and metastatic potential, after treatment with Carcinosinum in different homeopathic dilutions (12cH, 30cH, 200cH) shaken mechanically in pure, sterile, water from a commercial stock dilution. Treated cells were cultured in R10 medium, using 24-well plates, 105 cells per well, and treated with vehicle, Carcinosinum 12cH, 30cH or 200cH; untreated cells were used as the baseline control. After 24 hours of treatment, the percentage of apoptotic cells was analyzed by annexin V. Cell morphology was evaluated by microscopy after hematoxylin-eosin and Giemsa staining, whilst HER-2 expression was assessed using immunocytochemistry. The metastatic potential was determined by the expression and activity of the enzyme matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) using zymography. The cytokine profile was established using the cytometric bead array method. Treatment of 4T1 cells in vitro with Carcinosinum 30cH produced an increase in the number of annexin V-positive cells (apoptosis) and decreased expression of proactivated MMP-9. Cells treated with Carcinosinum 200cH presented hyper-expression of HER-2 on the plasma membrane, identified by immunocytochemistry. There were no differences in cytokine production among treatments. The data show promising results for Carcinosinum 30cH in vitro, but in vivo studies are also required to evaluate the role of tumor microenvironment in its effects.
Resumo
O presente estudo teve como objetivo identificar possíveis alterações fenotípicas em células 4T1 (adenocarcinoma mamário murino) in vitro , incluindo viabilidade, expressão de HER-2 (receptor do fator de crescimento epidérmico humano tipo 2) e potencial metastático, após tratamento com Carcinosinum em diferentes diluições homeopáticas (12cH, 30cH, 200cH) agitadas mecanicamente em água pura e estéril a partir de uma solução estoque comercial. As células tratadas foram cultivadas em meio R10, utilizando placas de 24 poços, com 10⁵ células por poço, e tratadas com veículo, Carcinosinum 12cH, 30cH ou 200cH; células não tratadas foram utilizadas como controle basal. Após 24 horas de tratamento, a porcentagem de células apoptóticas foi analisada por anexina V. A morfologia celular foi avaliada por microscopia após coloração com hematoxilina-eosina e Giemsa, enquanto a expressão de HER-2 foi avaliada por imunocitoquímica. O potencial metastático foi determinado pela expressão e atividade da enzima metaloproteinase de matriz 9 (MMP-9) por zimografia. O perfil de citocinas foi estabelecido utilizando o método de citometria de fluxo com microesferas. O tratamento in vitro de células 4T1 com Carcinosinum 30cH resultou em um aumento no número de células positivas para anexina V (apoptose) e em uma diminuição na expressão da MMP-9 pró-ativada. As células tratadas com Carcinosinum 200cH apresentaram hiperexpressão de HER-2 na membrana plasmática, identificada por imunocitoquímica. Não houve diferenças na produção de citocinas entre os tratamentos. Os dados mostram resultados promissores para o Carcinosinum 30cH in vitro , mas estudos in vivo também são necessários para avaliar o papel do microambiente tumoral em seus efeitos.
Palavras-chave
Homeopathy | Carcinosinum | tumor cells | in vitro
DA SILVA, Thaís Cristina et al. Phenotypic Changes in Mammary Adenocarcinoma (4T1) cells In Vitro after Treatment with Carcinosinum. Homeopathy, v. 111, n. 04, p. 278-287, 2022.
